腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）属于微小病毒科( parvovirμs)，为无包膜的单链线状 DNA 缺陷型病毒。对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。通常需要辅助病毒（通常为腺病毒）参与复制。重组腺相关病毒（recombinant AAV, rAAV）源于非致病的野生型腺相关病毒，是利用AAV2型基因组与不同血清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体，可将目的基因的CDS区序列或者RNAi干扰序列插入rAAV表达质粒中，包装病毒后感染细胞完成对目的基因的操作。 由于腺相关病毒具有高组织特异性、低免疫原性、宿主范围广、良好的扩散性、安全性高以及表达稳定和物理性质稳定等优点，已被广泛地应用于基础研究、动物体内研究和临床试验中，且已成为基因治疗领域中最具前景的病毒载体之一。

腺相关病毒血清型众多(12种)，不同血清型对不同组织亲和性不同。因此在具体科学研究中， 以下问题往往困扰着广大科研工作者：选择何种血清型？如何注射？注射多少病毒？注射部位如 何选择？注射多久检测？ 常见的注射部位（大脑、视网膜、肝脏、心脏和动脉、肺脏、肾脏、肌肉、肠）和方法，归纳 如下：

一、大脑 大脑组织常用血清型有 AAV1，AAV2，AAV5，AAV8 和 AAV9，其中神经组织常见的血清型有 AAV2，AAV5 和 AAV8。对大脑组织而言，AAV5 应用范围更广，AAV8 更有效（值得注意的是， 在猴子的神经组织中，AAV5 更有效）。从作用效果上看，AAV8 大于 AAV1。

 针对大脑组织不同部位，AAV 不同血清型靶向性有所差异：

1）海马组织：AAV9 比 AAV8 更有效；

2）神经组织不同的细胞，不同血清型靶向性不同：如神经元常用的血清型有 AAV1、AAV2、AAV5 和 AAV9；星形胶质细胞和少突胶质细胞常用的血清型有 AAV1 和 AAV5 。

 在所有组织中，AAV2 适用性广且在脑部组织也有所体现，例如其可以达到大脑组织 75%的区 域。AAV2、AAV5、AAV8 和 AAV9 也比较常见，应根据不同组织进一步慎重选择，在此介绍几 种特例：

1、肠神经系统(Enteric Nervoμs System ENS)，是由神经细胞组成的复杂网络，遍布整个肠胃消 化管道。该神经系统在人体躯干下部，属于迷走神经，以薄层的形式分布于消化肌之间，调节消 化。常用 AAV5、AAV6、AAV8 和 AAV9 ，AAV6 对肠神经胶质和神经元有一定的靶向性。注射 部位可以选择降结肠，注射量和滴度： 滴度为 1.3 × 10^12 GC/ml 的病毒注射 5 μl 即可。检 测时间：注射后 2 周开始表达，2-6 周均有检测。

2、脑组织常见的血清型为 AAV9，注射方法：左心室注射或者侧脑室注射。注射剂量和滴度： 选择滴度为 0.5–4.0× 10^11 GC/ml 的病毒液，稀释成 100μl ，注射两周之后(14d) 开始检测。 下图为一些脑部组织注射情况：

二、视网膜

视网膜组织常用血清型有 AAV1、 AAV2 和 AAV5 。视网膜组织由于其特殊性，因而有自身的 特点：注射成功率 20-30%，容易造成视网膜炎症和损伤，注射完需要使用 1% 阿托品（和少 量新霉素、多粘菌素 B 硫酸盐和地塞米松眼膏施用于眼睛，延长瞳孔扩张时间，减少腺体分泌， 减少炎症反应），连续使用 3-5 d 。其常用的注射量为 0.5 μl ，病毒滴度 1.5x10^7 GC/ml 。 常用注射方法：视网膜下注射或者玻璃体注射。

但不同血清型又有不同特点：AAV1 主要作用于视网膜上皮细胞，注射后 2-4 周可以检测；AAV2 主要作用于感光细胞、视网膜上皮细胞和玻璃体，AAV2 玻璃体注射后分布广泛，2-4 周可以检 测； AAV5 可作用于视网膜上皮细胞和感光细胞，在感光细胞中表达 AA5>AAV2，2-4 周检测。 下图为一些视网膜组织的注射情况：

三、肝脏

AAV2、AAV5、AAV7 和 AAV8，其中 AAV7 和 AAV8 的效率是 AAV2 的 10-100 倍。注射部 位常选择门静脉、外周静脉和尾静脉。注射病毒滴度一般选择 8× 10^10-2× 10^12(GC/kg)（人、灵长类）；1× 10^11 GC/只鼠，稀释成 50-100 μl 进行尾静脉注射；注射 2 周之后可以检测。 下图为肝脏注射的一些情况：

四、心脏和动脉

对心脏和动脉而言，常用血清型有：AAV1、AAV6、AAV8 和 AAV9 。其中 AAV2、AAV5、AAV7 也可以使用，但是表达比较慢，3 个月后表达量才能与 AAV1、AAV6 表达量相当。所有血清型 中 AAV8 和 AAV9 最有效，2 个月左右其表达量达到最高。 常见注射部位为冠状动脉、主动脉、心肌和尾静脉。注射病毒滴度为 1.9× 10^11-10^12 GC/ml， 稀释成 100 μl- 250μl（大鼠剂量稍高于小鼠）注射；但是对于心脏原点注射而言，常采用 10^10 GC/ml 病毒滴度，稀释成 20μl 使用。检测时间：一般在 2 周之后可以检测。

五、肺脏

肺脏常用血清型有 AAV1、AAV2、AAV5、AAV6 和 AAV9。由于肺脏表面唾液酸受体分布比较 多，因此 AAV5 型比较常用；相比之下 AAV2 和 AAV6 转导效率相当。常见的注射方式有滴鼻、 雾化吸入或气管内注射，注射病毒滴度为 10^12 GC/ml ，稀释成 3 μl，注射完之后 2 周可以 检测表达情况。下图为注射的一些情况：

六、肾脏 肾脏常用血清型有 AAV2、AAV8 和 AAV9。注射病毒的滴度一般选择 1-5× 10^11 GC/ml，稀 释成 50-200 μl 注射。常见的注射部位有肾动脉、肾静脉和左髂脉、腹主动脉，注射完 2 周之 后可以检测表达情况。下图为注射的一些情况：

七、肌肉

肌肉组织常用血清型有 AAV2、AAV8 和 AAV9。其中 AAV8、AAV9 最常用，心肌、胰腺和肾 上腺也是如此。骨骼肌分为快速和慢速肌纤维，AAV2 常作用于慢速肌纤维，AAV6 则对二者都 有效。对不同年龄阶段的鼠，注射剂量有所不同：幼鼠选择的病毒量为 7× 10^10-1.2× 10^11 GC/g；成年鼠选择的病毒量为 3.5 × 10^11-7× 10^12 GC/只；但是低剂量的 AAV9 不能到达所 有心肌细胞。下图为注射的一些情况：

八、肠

肠组织常用血清型有 AAV1、AAV2 和 AAV5。常见的注射方式有口服、灌肠、腹腔注射、肠系 膜动脉注射。一般选择注射滴度 1× 10^11 GC/ml ,稀释成 100 μl（PBS 或者稀释液稀释）使用， 注射 2 周后可以检测。

常用组织细胞特异性启动子列表