基安生物使用的是第三代慢病毒高效率包装系统，具有很高的安全性（将gag, pol 和 rev 基因分到了不同质粒中，且互相之间没有任何同源序列，大大降低了复 制型慢病毒的产生几率；去掉了 tat transact tivation 基因，成为“自杀”性病 毒），它能够感染的细胞种类大大增加，但对不同的细胞和组织的亲嗜性仍有差别。

目前，利用慢病毒感染目的细胞是构建稳转株的主要途径，其原理是将目的基因表达框及报告基因表达框构建至慢病毒穿梭质粒上，通过与辅组质粒共转染293细胞，包装出具有广泛感染能力的假病毒颗粒。为客户提供稳定可靠的慢病毒表达质粒也是我们的核心业务之一！

不同孔板慢病毒用量推荐

感染方法：

A. 按实验需要将细胞铺板（比如 6 孔板）。细胞数以第 2 天密度约 50%为宜。 37℃ 培养过夜。

B. 感染前，从-80℃冰箱取出后在冰浴融化病毒，参考相关文献或者根据预实验 得到的 MOI 值用新鲜完全培养基稀释成所需浓度。注意：轻轻混匀，不要使用 振荡器。

C. 吸去细胞原有培养基，将按照MOI 稀释好的病毒液加入细胞中。

D. 加入 Polybrene（对于 293 细胞，终浓度 6μg/ml），轻轻摇匀。37℃培养过夜。 注：Polybrene 可以和病毒原液一起加到培养基中：慢病毒对目的细胞感染效率较 低时，可以通过提高MOI 值来提高感染效率，但是当MOI 高于 20 时，我们建 议客户添加Polybrene（终浓度 2～12μg/ml，浓度因不同的细胞而异，具体的请 参考相关文献）来提高病毒的感染效率。如果感染目的细胞是 Jμrkat，kasμmi， NB4，H929，GBC-SD，MCF-7 等，建议不要添加Polybrene；大部分原代细胞 感染也不需要添加Polybrene，以上仅供参考，具体详见附录。

E. 感染 24 小时后，吸除含慢病毒的培养基，换为新鲜的培养基。

F. 继续培养 48-72 小时后，根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。